Kanamycin ™ REAGEN η εξάρτηση δοκιμής της ELISA είναι ανταγωνιστικό ενζυμικό immunoassay για την ποσοτική ανάλυση Kanamycin στο κρέας/το συκώτι/το νεφρό, το κύτταρο lysate, τα ούρα, τον ορό και το γάλα.
Υψηλή αποκατάσταση (>80%), γρήγορες (10-40 λεπτά), και οικονομικώς αποδοτικές μέθοδοι εξαγωγής.
Το όριο ανίχνευσης είναι 0,2 ng/g.
Υψηλή δυνατότητα αναπαραγωγής.
Μια γρήγορη δοκιμή της ELISA (ώρες λιγότερο από 1 ανεξάρτητα από τον αριθμό δειγμάτων).
Η μέθοδος είναι βασισμένη σε μια ανταγωνιστική χρωματομετρική δοκιμή της ELISA. Το kanamycin-BSA έχει ντυθεί στα φρεάτια πιάτων. Κατά τη διάρκεια της ανάλυσης, το αντίσωμα δειγμάτων και Kanamycin (αντίσωμα #1) και η HRP-κλίση (HRP-κλιμένο αντίσωμα #2) προστίθενται στα φρεάτια για την επώαση. Εάν το Kanamycin υπόλειμμα είναι παρόν στο δείγμα, θα ανταγωνιστεί με Kanamycin στα φρεάτια πιάτων για το Kanamycin αντίσωμα, το δευτεροβάθμιο αντίσωμα, που κολλιέται με ένα peroxidase ένζυμο, στοχεύει στο αρχικό αντίσωμα που περιπλέκεται στο φάρμακο που ντύνεται στα φρεάτια πιάτων. Η προκύπτουσα ένταση χρώματος, μετά από την προσθήκη του υποστρώματος HRP (TMB), έχει μια αντίστροφη σχέση με τη Kanamycin συγκέντρωση υπολειμμάτων στο δείγμα.
Kanamycin ™ REAGEN η εξάρτηση δοκιμής της ELISA έχει την ικανότητα για 96 προσδιορισμούς ή τη δοκιμή 42 δειγμάτων εις διπλούν (υποθέτοντας 12 φρεάτια για τα πρότυπα). Επιστρέψτε οποιαδήποτε αχρησιμοποίητα microwells στην τσάντα φύλλων αλουμινίου και τα ξανασφραγίστε με desiccant που παρέχεται στην αρχική συσκευασία. Αποθηκεύστε την εξάρτηση σε 2-8°C *. Η ζωή του προϊόντος στο ράφι είναι 12 μήνες όταν αποθηκεύεται κατάλληλα η εξάρτηση.
Περιεχόμενο εξαρτήσεων | Ποσό | Αποθήκευση |
Kanamycin-ντυμένο πιάτο | 1 X 96 καλά καλύπτουν | 2-8°C |
Kanamycin πρότυπα Αρνητικός έλεγχος (άσπρος σωλήνας ΚΑΠ) 0,2 ng/mL (κίτρινος σωλήνας ΚΑΠ) 0,6 ng/mL (πορτοκαλής σωλήνας ΚΑΠ) 1.8 ng/mL (ρόδινος σωλήνας ΚΑΠ) 5.4 ng/mL (πορφυρός σωλήνας ΚΑΠ) 16.2 ng/mL (μπλε σωλήνας ΚΑΠ) 1000 ng/mL (καρφώνοντας, προαιρετικός, κόκκινος σωλήνας ΚΑΠ) |
1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL |
2-8℃
|
Kanamycin Ab#1 | 6.0mL | 2-8℃ |
HRP-κλιμένο Ab#2 | 6.0mL | |
10×Sample diluent | 15 μιλ. | |
20× λύση πλυσίματος | 28mL | |
Απομονωτής στάσεων | 12mL | |
Υπόστρωμα TMB | 12mL | |
10×Sample απομονωτής αποσπάσματος (προαιρετικός) | 15mL | |
Απομονωτής ισορροπίας δειγμάτων | 2 μιλ. |
Εάν δεν προγραμματίζετε να χρησιμοποιήσετε την εξάρτηση για πάνω από 1 μήνα, Kanamycin καταστημάτων τυποποιημένο απόθεμα, Kanamycin HRP-κλιμένο #1and αντίσωμα #2 αντισωμάτων σε -20°C ή σε έναν ψυκτήρα.
Τύπος δειγμάτων | Όριο ανίχνευσης (ng/g ή ppb) |
Ψάρια/γαρίδες/κρέας/συκώτι/νεφρό | 8 |
Κύτταρο Lysate | 2 |
Ούρα το /Serum | 5 |
Γάλα | 2 |
Κατάλοιπα | Cross-Reactivity (%) |
Kanamycin | 100 |
Streptomycin | < 0=""> |
Dihydrostreptomycin | < 0=""> |
Νεομυκίνη | < 0=""> |
Microtiter αναγνώστης πιάτων (450 NM)
Αναμίκτης ιστού (π.χ. κύριο Homogenizer ιστού Omni)
Αναμίκτης δίνης (π.χ. αναμίκτης δίνης μεγαλοφυίας από VWR)
10, 20, 100 και 1000 σιφώνια uL
Πολυδιαυλικό σιφώνιο: 50-300 uL (προαιρετικό)
Να είστε βέβαιος ότι τα δείγματα αποθηκεύονται κατάλληλα. Γενικά, τα δείγματα πρέπει να καταψυχτούν σε 2-4°C για όχι περισσότερους από 1-2 ημέρες. Δείγματα παγώματος σε ένα ελάχιστο -20°C εάν πρέπει να αποθηκευτούν για μια πιό μεγάλη περίοδο. Τα παγωμένα δείγματα μπορούν να ξεπαγωθούν στην αίθουσα temps (20 – 25°C/68 – 77°F) ή σε ένα ψυγείο πριν τη χρήση.
Πάρτε το uL 100 του κυττάρου lysate, προσθέστε το uL 900 diluent 1×Sample του απομονωτή, μίγμα καλά.
Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση για 5 λεπτά σε 4000 Χ γ.
Πάρτε το uL 50 του υπερκείμενου νερού ανά καλά για τη δοκιμή.
Σημείωση: Παράγοντας διαλύσεων: 10.
Σε 1,0 γ του ομογενοποιημένου δείγματος, προσθέστε 4.0mL του απομονωτή αποσπάσματος 1×Sample,
Δίνη το δείγμα για τα λεπτά 1 με τον αναμίκτη δίνης.
Υποβάλτε το δείγμα σε φυγοκέντρωση για 5 λεπτά σε 4.000 Χ γ.
Προσεκτικά η μεταφορά 200uL του τοπ στρώματος σε έναν νέο σωλήνα, προσθέτει 1.375μιλ.diluentδειγμάτων1Xκαι25uLτουαπομονωτήισορροπίαςδειγμάτων, δίνηγια30δευτερόλεπτα.
Χρήση 50uL ανά καλά για τη δοκιμή.
Σημείωση: Παράγοντας διαλύσεων: 40.
Πάρτε 50uL των ούρων ή το δείγμα ορών, προσθέτει 1,2 μιλ. diluent δειγμάτων 1X, μίγμα καλά.
Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση για 5 λεπτά σε 4.000 Χ γ.
Πάρτε 50uL του υπερκείμενου νερού ανά καλά για τη δοκιμή.
Σημείωση: Παράγοντας διαλύσεων: 25.
Σημείωση: Παράγοντας διαλύσεων: 10
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟΣ: Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να παρουσιαστούν μέχρι τη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση (1 – 2 ώρες σε 20 – 25°C/68 – 77°F) Σιγουρευτείτε ότι διαβάζετε το τμήμα «προειδοποιήσεων και προφυλάξεων» σελίδας 3. Οι λύσεις πρέπει να προετοιμαστούν ακριβώς πριν από τη δοκιμή της ELISA. Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να αναμιχθούν με ήπια να αναστρέψουν ή να στροβιλιστούν πριν από τη χρήση. Προετοιμάστε τους όγκους που απαιτούνται για τον αριθμό φρεατίων που οργανώνονται. Μην επιστρέψτε τα αντιδραστήρια στους αρχικούς σωλήνες/τα μπουκάλια αποθεμάτων. Χρησιμοποίηση των μίας χρήσης δεξαμενών όταν μπορούν να ελαχιστοποιήσουν τα διαχειριζόμενα αντιδραστήρια τον κίνδυνο μόλυνσης και συστήνονται.
Μίγμα 1 όγκος της λύσης πλυσίματος 20X με 19 όγκους του αποσταγμένου νερού.
Ονομάστε τις μεμονωμένες λουρίδες που θα χρησιμοποιηθούν και αντιδραστήρια υποπολλαπλάσιου για ακόλουθο παράδειγμα:
Συστατικό | Όγκος ανά αντίδραση | 24 αντιδράσεις |
Kanamycin αντίσωμα #1 | 50uL | 1.2mL |
HRP-κλιμένο αβ #2 | 50uL | 1.2mL |
1X λύση πλυσίματος | 1,0 μιλ. | 24mL |
Απομονωτής στάσεων | uL 100 | 2,4 μιλ. |
Υπόστρωμα TMB | uL 100 | 2,4 μιλ. |
Προσθέστε το uL 50 κάθε Kanamycin των προτύπων εις διπλούν στα διαφορετικά φρεάτια (προσθέστε τα πρότυπα στο πιάτο μόνο στη διαταγή από τη χαμηλή συγκέντρωση στην υψηλή συγκέντρωση).
Προσθέστε το uL 50 κάθε δείγματος εις διπλούν στα διαφορετικά φρεάτια δειγμάτων.
Προσθέστε το uL 50 HRP-κλιμένου Ab#2 σε κάθε ένα καλά και το uL 50 Kanamycin του αντισώματος #1 σε κάθε ένα καλά. Μίγμα καλά με ήπια να λικνίσει το πιάτο με το χέρι για τη δεκαετία του '30.
Επωάστε το πιάτο για 30 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου (20 – 25°C/68 – 77°F). (Αποφύγετε το άμεσο φως του ήλιου και τις κρύες κορυφές πάγκων κατά τη διάρκεια της επώασης. Κάλυψη του microtiter πιάτου ενώ η επώαση συστήνεται).
Πλύντε το πιάτο 4 φορές με το uL 250 της λύσης πλυσίματος 1X. Μετά από το τελευταίο πλύσιμο, αναστρέψτε το πιάτο και τρυπήστε ήπια το πιάτο ξηρό στις πετσέτες εγγράφου (εκτελέστε το επόμενο βήμα αμέσως μετά από τα βρώμικα ύδατα πιάτων. Μην επιτρέψτε στο πιάτο για να στεγνώσετε μεταξύ των λειτουργώντας βημάτων).
Προσθέστε το uL 100 του υποστρώματος TMB. Χρόνος η αντίδραση αμέσως μετά από να προσθέσει το υπόστρωμα. Αναμίξτε τη λύση με ήπια να λικνίσει το πιάτο με το χέρι για τη δεκαετία του '30 επωάζοντας (μην βάλτε οποιοδήποτε υπόστρωμα πίσω στο αρχικό εμπορευματοκιβώτιο για να αποφύγετε οποιαδήποτε πιθανή μόλυνση. Οποιαδήποτε λύση υποστρωμάτων που εκθέτει το χρωματισμό είναι ενδεικτική της επιδείνωσης και πρέπει να απορριφθεί. Κάλυψη του microtiter πιάτου ενώ η επώαση συστήνεται).
Μετά από να επωάσει για 15 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου (20 – 25°C/68 – 77°F), προσθέστε το uL 100 του απομονωτή στάσεων για να σταματήσετε την ενζυμική αντίδραση.
Διαβάστε το πιάτο το συντομότερο δυνατό μετά από την προσθήκη του απομονωτή στάσεων σε έναν αναγνώστη πιάτων με το μήκος κύματος 450 NM (πρίν διαβάζει, χρησιμοποιήστε lint-free σκουπίζει στο κατώτατο σημείο του πιάτου για να μην εξασφαλίσει καμία υγρασία ή τα δακτυλικά αποτυπώματα παρεμποδίζουν τις αναγνώσεις).
Μια τυποποιημένη καμπύλη μπορεί να κατασκευαστεί με τη χάραξη της μέσης σχετικής απορροφητικότητας (%) που λαμβάνεται από κάθε πρότυπα αναφοράς ενάντια στη συγκέντρωσή της σε ng/mL σε μια λογαριθμική καμπύλη.
Σχετική απορροφητικότητα (%) = απορροφητικότητα μηδέν τυποποιημένη ή δείγμα Χ 100
Χρησιμοποιήστε τις μέσες σχετικές τιμές απορροφητικότητας για κάθε δείγμα για να καθορίσετε την αντίστοιχη συγκέντρωση του δοκιμασμένου φαρμάκου σε ng/mL από την τυποποιημένη καμπύλη.
Ο ακόλουθος αριθμός είναι μια χαρακτηριστική chloramphenicol τυποποιημένη καμπύλη.
Μας ελάτε σε επαφή με ανά πάσα στιγμή