96 Δοκιμή Ελέγχου ELISA για την ανίχνευση καναμυκίνης υψηλής αναπαραγωγικότητας

Κίτ δοκιμής ELISA καναμυκίνης

Περιγραφή του προϊόντος

REAGEN^ΤΜΤο τεστ ELISA της καναμυκίνης είναι ένα ανταγωνιστικό ενζυμικό ανοσολογικό τεστ για την ποσοτική ανάλυση της καναμυκίνης στο κρέας/στο συκώτι/στο νεφρό, στο κυτταρικό λυσικό άλας, στα ούρα, στον ορό και στο γάλα.

Τα μοναδικά χαρακτηριστικά του κιτ είναι:

• Υψηλή ανάκτηση (> 80%), γρήγορες (10-40 λεπτά) και οικονομικά αποδοτικές μεθόδους εξαγωγής.

• Το όριο ανίχνευσης είναι 0,2 ng/g.

• Υψηλή αναπαραγωγικότητα.

• Ταχύς έλεγχος ELISA (λιγότερο από 1 ώρα ανεξάρτητα από τον αριθμό των δειγμάτων).

Σύνοψη της διαδικασίας

Η μέθοδος αυτή βασίζεται σε ανταγωνιστική χρωματιστομετρική δοκιμή ELISA.το δείγμα και το αντισώμα καναμυκίνης (αντίσωμα #1) και το HRP-Conjugate (αντισώμα HRP-Conjugated #2) προστίθενται στα πηγάδια για επώαση.Αν το κατάλοιπο καναμυκίνης είναι παρόν στο δείγμα, θα ανταγωνιστεί με την καναμυκίνη στα πηγάδια της πλάκας για το αντισώμα καναμυκίνης.στοχεύει το πρωταρχικό αντισώμα που είναι περίπλοκο στο φάρμακο που καλύπτεται από τα πηγάδια της πλάκαςΗ προκύπτουσα ένταση χρώματος, μετά την προσθήκη του υποστρώματος HRP (TMB), έχει αντίστροφη σχέση με τη συγκέντρωση υπολειμμάτων καναμυκίνης στο δείγμα.

Περιεχόμενο του κιτ, αποθήκευση και διάρκεια ζωής

REAGEN^ΤΜΤο τεστ ELISA για την καναμυκίνη έχει χωρητικότητα 96 προσδιορισμών ή δοκιμών 42 δειγμάτων σε διπλό αντίγραφο (υποθέτοντας 12 πηγάδια για τα πρότυπα).Επιστρέψτε τα μη χρησιμοποιημένα μικροκύτταρα στην τσάντα από χαλί και ξανασφράγισέ τα με το αποξηρατικό που παρέχεται στην αρχική συσκευασίαΤο κιτ πρέπει να φυλάσσεται σε θερμοκρασία 2- 8°C.* Η διάρκεια ζωής είναι 12 μήνες όταν το κιτ φυλάσσεται σωστά.

Εάν δεν σκοπεύετε να χρησιμοποιήσετε το κιτ για περισσότερο από 1 μήνα, αποθηκεύστε το καναμυκίνη Standard Stock, το αντισώμα καναμυκίνη #1 και το αντισώμα HRP- συνδυασμένο #2 σε θερμοκρασία -20°C ή σε κατάψυξη.

Ευαισθησία (όριο ανίχνευσης)

Ειδικότητα (σταυροδραστικότητα)

Απαιτούμενα υλικά δεν παρέχονται με το κιτ

• Διαβάτης πλάκας μικροτύτρου (450 nm)

• Μείκτης ιστών (π.χ. Omni Tissue Master Homogenizer)

• Μείγμα δίνης (π.χ. Μείγμα δίνης Genie από την VWR)

• 10, 20, 100 και 1000 ΠΙΠΕΤΑ

• Πολυκανάλινη πίπετα: 50-300 IU (προαιρετική)

Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις

• Τα πρότυπα περιέχουν καναμυκίνη.
• Μην χρησιμοποιείτε το κιτ μετά την ημερομηνία λήξης.
• Δεν πρέπει να αναμειγνύονται αντιδραστήρες από διαφορετικά κιτ ή παρτίδες, εκτός από τα συστατικά με τον ίδιο αριθμό μέρους εντός των ημερομηνιών λήξης τους.
• Προσπαθήστε να διατηρήσετε μια εργαστηριακή θερμοκρασία των 20° 25° C (68° 77° F). Αποφύγετε την εκτέλεση δοκιμών κάτω ή κοντά σε εξαεριστικές πύλες, καθώς αυτό μπορεί να προκαλέσει υπερβολική ψύξη, θέρμανση και/ή εξατμίωση.να μην εκτελούνται δοκιμές σε άμεσο ηλιακό φως, καθώς αυτό μπορεί να προκαλέσει υπερβολική θερμότητα και εξατμίωση.Οι ψυχρές κορυφές των τραπεζών θα πρέπει να αποφεύγονται τοποθετώντας πολλά στρώματα χαρτοπετσέτας ή κάποιο άλλο μονωτικό υλικό κάτω από τις πλάκες δοκιμής κατά τη διάρκεια της επώασης..
• Βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείτε μόνο αποσταγμένο ή αποιονισμένο νερό, δεδομένου ότι η ποιότητα του νερού είναι πολύ σημαντική.
• Κατά την πίπετση δειγμάτων ή αντιδραστηρίων σε άδεια πλάκα μικροτίτρου, τοποθετήστε τις άκρες της πίπεττας στην κάτω γωνία του πηγάδι, σε επαφή με το πλαστικό.
• Οι ενδυμασίες των πινακίδων δοκιμών πρέπει να είναι χρονικές όσο το δυνατόν πιο ακριβώς.
• Προσθέστε πρότυπα στην πλάκα μόνο με τη σειρά από χαμηλή συγκέντρωση σε υψηλή συγκέντρωση, καθώς αυτό θα ελαχιστοποιήσει τον κίνδυνο συμβιβασμού της πρότυπης καμπύλης.
• Πάντα να κρύβετε τις πλάκες σε σφραγισμένες σακούλες με αποξηρατικό για να διατηρήσετε τη σταθερότητα.Αποτρέψτε τη δημιουργία συμπύκνωσης στις πλάκες επιτρέποντάς τους να ισορροπήσουν σε θερμοκρασία δωματίου (20 25 ° C / 68 77 ° F) ενώ βρίσκονται στην συσκευασία.

Βεβαιωθείτε ότι τα δείγματα αποθηκεύονται σωστά. Γενικά, τα δείγματα θα πρέπει να διατηρούνται σε ψυγείο σε θερμοκρασία 2-4°C για όχι περισσότερο από 1-2 ημέρες.Τα κατεψυγμένα δείγματα μπορούν να αποψυγούνται σε θερμοκρασία δωματίου (20°C / 68°F) ή σε ψυγείο πριν από τη χρήση..

• Προετοιμασία 1 × αραιωτικού δείγματος:Αναμειγνύεται 1 όγκος 10 × αραιωτικού δείγματος με 9 όγκους αποσταγμένου νερού.
• Παρασκευή 1 ×Δοκιμαστικό εξωτερικό αποθέμα:Μείξτε 1 όγκο 10 × δείγμα Ext. με 9 όγκους αποσταγμένου νερού.

Λυσάτης κυττάρων

• Παίρνουμε 100 Ι.Λ. κυτταρικού λυσαμένου, προσθέτουμε 900 Ι.Λ. 1 × δείγματος αραιωτικού Buffer, αναμιγνύουμε καλά.

• Κεντρίφωση για 5 λεπτά σε 4000 x g.

• Πάρτε 50 ιλιτρικές λίμνες του υπερκυκλωτικού ανά πηγή για την ανάλυση.

Σημείωση: Συντελεστής αραίωσης: 10.

Καραμέλες/ψάρια/κρέας/λίκνο/λίκνο

• Στο 1,0 g του ομογενοποιημένου δείγματος, προστίθενται 4,0 ml του 1×Sample Ext.

• Κάντε στροφή στο δείγμα για 1 λεπτό με τον αμιγώς αναμιγνυόμενο μηχανισμό.

• Το δείγμα φυγοκεντρώνεται για 5 λεπτά σε θερμοκρασία 4.000 x g.

• Μεταφέρετε προσεκτικά 200uL από το ανώτερο στρώμα σε νέο σωλήνα,προσθέστε 1.375 ml 1x αραιωτικού δείγματος και 25 uL αποθέματος αποθέματος δείγματος, δίνη για 30 δευτερόλεπτα.

• Χρησιμοποιήστε 50uL ανά πηγάδι για την ανάλυση.

Σημείωση: Συντελεστής αραίωσης: 40.

Ούρα/Σόρος

• Πάρτε 50uL δείγμα ούρων ή ορού, προσθέστε 1,2 ml 1X αραιωτικού δείγματος, ανακατέψτε καλά.

• Κεντρίφωση για 5 λεπτά σε 4.000 x g.

• Πάρτε 50uL του υπερκυκλώματος ανά πηγάδι για την ανάλυση.

Σημείωση: Συντελεστής αραίωσης: 25.

Γάλα

• Προσθέστε 100uL δείγματος γάλακτος σε σωλήνα φυγοκέντρωσης, προσθέστε 900uL 1X αραιωτικού δείγματος.
• Στροβιλίστε έντονα για 30 δευτερόλεπτα.
• Κεντρίφωση σε 4.000 x g για 10 λεπτά.
• Χρησιμοποιήστε 50uL του δείγματος υπερυψωμένου για την ανάλυση.

Σημείωση: Παράγοντας αραίωσης:10

Πρωτόκολλο δοκιμής KANAMYCIN ELISA

Προετοιμασία αντιδραστηρίου

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να φθάνουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση. (1 2 ώρες20 ¢ 25°C / 68 77°Φ) Διαβάστε την ενότητα " Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις " στοσελίδα3.Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να αναμιγνύονται με απαλή αντιστροφή ή περιστροφή πριν από τη χρήση.Μην επιστρέφετε τα αντιδραστήρια στους αρχικούς σωλήνες/φιαλίδια αποθήκευσηςΗ χρήση αποθεμάτων μιας χρήσης κατά τον χειρισμό αντιδραστηρίων μπορεί να ελαχιστοποιήσει τον κίνδυνο μόλυνσης και συνιστάται.

• Προετοιμασία του διαλύματος πλύσης 1X

Αναμειγνύεται 1 όγκος 20X Λύσης Πλύσης με 19 όγκο αποσταγμένου νερού.

Πρωτόκολλο δοκιμής ELISA

Οι μεμονωμένες λωρίδες που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν και τα αντιδραστήρια αλκοοτίδας επισημαίνονται με το ακόλουθο παράδειγμα:

• Προστίθενται 50 IU κάθε καναμυκίνης στα διαφορετικά πηγάδια (προστίθενται στα πιάτα μόνο με τη σειρά από χαμηλή συγκέντρωση σε υψηλή συγκέντρωση).

• Προσθέστε 50 IU κάθε δείγματος σε διπλό αντίγραφο σε διαφορετικές δεξαμενές δειγματοληψίας.

• Προσθέστε 50 IU HRP-Conjugated Ab#2 σε κάθε πηγή και 50 IU Αντισωμάτων Καναμυκίνης #1 σε κάθε πηγή.

• Η πλάκα επώασης διαρκεί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (20°C / 68°F). (Αποφύγετε το άμεσο ηλιακό φως και τα κρύα τραπέζια κατά τη διάρκεια της επώασης.

• Μετά το τελευταίο πλύσιμο, αναστρέψτε το πιάτο και χτυπήστε απαλά το πιάτο να στεγνώσει σε χαρτοπετσέτες (Αναλάβετε το επόμενο βήμα αμέσως μετά το πλύσιμο των πιάτων.Μην αφήνετε την πλάκα να στεγνώσει στον αέρα μεταξύ των σταδίων εργασίας).

• Προσθέστε 100 IU υποστρώματος TMB. Χρονομετρήσετε την αντίδραση αμέσως μετά την προσθήκη του υποστρώματος. Αναμείξτε το διάλυμα κουνώντας απαλά το πιάτο χειροκίνητα για 30 δευτερόλεπτα κατά την επώασηΚάθε διάλυμα υποστρώματος που παρουσιάζει χρώμα είναι ενδεικτικό της φθοράς και πρέπει να απορρίπτεται.Συνιστάται να καλύπτεται η πλάκα μικροτύτρου κατά τη διάρκεια της επώασης).

• Μετά την επώαση για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (20 ¢ 25°C / 68 77°F), προστίθενται 100 IU Stop Buffer για να σταματήσει η αντίδραση του ενζύμου.

• Διαβάστε την πινακίδα το συντομότερο δυνατόν μετά την προσθήκη του Stop Buffer σε αναγνώστη πινακίδων με μήκος κύματος 450 nm (Πριν από την ανάγνωση,να χρησιμοποιεί ένα χαρτοπετσέτα χωρίς πτερύγια στο κάτω μέρος της πλάκας για να διασφαλίζει ότι η υγρασία ή τα δακτυλικά αποτυπώματα δεν παρεμβαίνουν στις ενδείξεις).

Υπολογισμοί συγκέντρωσης καναμυκίνης

Μια τυποποιημένη καμπύλη μπορεί να κατασκευαστεί με την απεικόνιση της μέσης σχετικής απορρόφησης (%) που λαμβάνεται από κάθε πρότυπο αναφοράς σε σύγκριση με τη συγκέντρωσή του σε ng/mL σε λογάριθμη καμπύλη.

Σχετική απορρόφηση (%) =στάνταρ μηδενικής απορρόφησηςή δείγμα x 100

Χρησιμοποιούνται οι μέσες τιμές σχετικής απορρόφησης για κάθε δείγμα για τον προσδιορισμό της αντίστοιχης συγκέντρωσης του ελεγχόμενου φαρμάκου σε ng/mL από την τυποποιημένη καμπύλη.

Το ακόλουθο σχήμα είναι μια τυπική τυποποιημένη καμπύλη χλωραμφενικολ.